HEATR5B Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-412293-LAC-2

O gene humano HEATR5B codifica uma proteína contendo repetições HEAT, que se acredita atuar como um arcabouço (scaffold) para interações proteína–proteína, sustentando a montagem coordenada de complexos macromoleculares e a organização intracelular. Com base na biologia conservada das repetições HEAT, espera-se que o HEATR5B influencie processos como o transporte nucleocitoplasmático, a dinâmica do citoesqueleto e a regulação de vias de sinalização e relacionadas ao ciclo celular, ao modular a localização e a estabilidade de proteínas parceiras. A expressão alterada ou variações em fatores de arcabouço com repetições HEAT são frequentemente associadas à desregulação da proteostase e a respostas de estresse celular, mecanismos relevantes para a biologia de doenças proliferativas e do neurodesenvolvimento. Assim, modelos de perturbação do HEATR5B são úteis para investigar a conectividade de vias, mapear redes de interação e avaliar consequências transcriptômicas e fenotípicas a jusante em sistemas de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HEATR5B (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de HEATR5B numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HEATR5B (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição HEATR5B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HEATR5B. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo HEATR5B e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.