Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HB9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402097-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HB9 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HB9ダブルニカースプラスミド（h）およびHB9ダブルニカースプラスミド（h2）は、MNX1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: HB9 抗体 (F-5): sc-515769
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HB9 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402097-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HB9 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402097-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MNX1は、発生過程における腹側脊髄のパターン形成および運動ニューロンの分化に必須な、配列特異的DNA結合性のホメオボックス転写因子HB9をコードします。HB9は、モルフォゲンシグナル伝達の下流にある転写プログラムと統合的に働き、他のホメオドメイン因子と協調して、神経サブタイプの同一性、軸索ガイダンス特性、ならびに運動回路の成熟を確立します。造血系の文脈では、MNX1の発現異常や本遺伝子座を含む染色体再編成が急性白血病と関連することが示されており、異常な系譜指定や転写制御との関わりが注目されています。発生制御因子としてのMNX1は、神経新生、細胞運命決定、疾患に関連する転写制御異常のモデルにおいて、しばしば研究対象となっています。
HB9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MNX1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MNX1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MNX1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MNX1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。