hamartin Plasmide Double Nickase (m): sc-425739-NIC

Il gene murino **Tsc1** codifica l’**amartina**, una proteina scaffold che forma un complesso funzionale con **TSC2** (tuberina) e agisce come regolatore negativo chiave della segnalazione di **mTORC1**. Attraverso la sua attività **GAP** nei confronti di **Rheb** quando è associata a TSC2, il complesso TSC1/TSC2 integra segnali provenienti da **PI3K–AKT**, **AMPK** e da segnali legati all’energia o allo stress cellulare per limitare programmi di crescita anabolica, traduzione e autofagia. La perdita della funzione dell’amartina altera il controllo omeostatico delle dimensioni cellulari e del metabolismo ed è fortemente associata alla biologia del **complesso della sclerosi tuberosa**, inclusi fenotipi proliferativi e di neurosviluppo aberranti in modelli sperimentali. Di conseguenza, **Tsc1** è ampiamente utilizzato in studi su sensing dei nutrienti, proteostasi, funzione sinaptica e vie oncosoppressorie.

hamartin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tsc1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tsc1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tsc1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tsc1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.