GTPBP10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413794-ACT

Il gene umano **GTPBP10** codifica una proteina mitocondriale legante il GTP implicata nelle fasi tardive della maturazione del mitoribosoma, supportando l’assemblaggio della subunità ribosomiale grande e un’efficiente traduzione mitocondriale. Regolando la produzione dei componenti della fosforilazione ossidativa codificati dal DNA mitocondriale, GTPBP10 contribuisce all’integrità della catena respiratoria, alla generazione di ATP e alla proteostasi mitocondriale. L’alterazione della biogenesi del mitoribosoma e della traduzione mitocondriale è ampiamente associata a risposte allo stress bioenergetico, a modifiche dell’equilibrio redox e a vie di disfunzione mitocondriale, frequentemente studiate in modelli di malattie neuromuscolari e metaboliche, nonché nell’adattamento delle cellule tumorali. Di conseguenza, GTPBP10 rappresenta un nodo utile per studiare l’assemblaggio del ribosoma mitocondriale, la regolazione di OXPHOS e la segnalazione di stress a valle.

GTPBP10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GTPBP10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GTPBP10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GTPBP10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GTPBP10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GTPBP10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GTPBP10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GTPBP10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GTPBP10 nelle cellule tumorali con espressione di GTPBP10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.