GTPBP10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413794-ACT

ヒトGTPBP10は、ミトコンドリアのGTP結合タンパク質をコードしており、ミトリボソーム成熟の後期段階に関与して、リボソーム大サブユニットの組み立てと効率的なミトコンドリア翻訳を支えます。ミトコンドリアDNAにコードされた酸化的リン酸化（OXPHOS）構成要素の産生を調節することで、GTPBP10は呼吸鎖の健全性、ATP産生、ならびにミトコンドリアのプロテオスタシスに寄与します。ミトリボソーム生合成とミトコンドリア翻訳の攪乱は、一般にバイオエネルギー・ストレス応答、酸化還元バランスの変化、ミトコンドリア機能不全に関わる経路と広く関連しており、神経筋疾患や代謝疾患モデル、さらにはがん細胞の適応の研究でしばしば検討されます。そのためGTPBP10は、ミトコンドリアリボソームの組み立て、OXPHOS制御、および下流のストレスシグナル伝達を研究するうえで有用な結節点となります。

GTPBP10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GTPBP10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GTPBP10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GTPBP10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGTPBP10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GTPBP10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGTPBP10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGTPBP10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGTPBP10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGTPBP10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。