G_{α t1} CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401559-ACT

GNAT1 は、桿体視細胞における主要なシグナル伝達因子であるヘテロ三量体 G タンパク質の α サブユニット Gαt1（トランスデューシンα）をコードしており、光受容変換（phototransduction）カスケードにおいて、活性化されたロドプシンをエフェクター酵素へ結び付けます。光刺激を受けると、Gαt1 はホスホジエステラーゼの活性化を促進して cGMP 濃度を低下させ、環状ヌクレオチド依存性（CNG）チャネルの活性を調節し、膜の過分極を制御します。この経路は、GPCR シグナル伝達とセカンドメッセンジャー制御を統合することで、低照度条件下での視覚の高感度化と順応を支えます。GNAT1 を含む光受容変換構成要素の制御異常や発現変化は、遺伝性網膜機能障害の研究や、桿体シグナルの恒常性を乱す機構の解明において重要です。

Gα t1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GNAT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Gα t1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GNAT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGNAT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Gα t1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGNAT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGα t1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGNAT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGα t1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。