GSTT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420721

概要

マウスGstt1は、グルタチオンS-トランスフェラーゼ・シータ1（GSTT1）をコードしており、さまざまな求電子性の外来性化学物質（ゼノバイオティクス）や反応性の高い内因性代謝産物に対して、グルタチオン抱合を触媒する第II相解毒酵素である。GSTT1は、脂質過酸化産物やその他の反応性中間体の除去を促進することで、レドックス恒常性と酸化ストレスに対する細胞防御に寄与する。その活性は、グルタチオン代謝、化学発がん応答経路、さらに細胞のストレス適応に影響する求電子体/ROSシグナル伝達ネットワーク全体と交差している。GSTTファミリー機能の差異は、毒性物質への感受性、炎症に伴う組織傷害、ならびに解毒能が表現型を修飾しうる腫瘍生物学モデルの文脈で、しばしば研究対象となっている。

GSTT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGstt1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gstt1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gstt1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GSTT1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GSTT1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gstt1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GSTT1の機能に不可欠なGstt1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gstt1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GSTT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGSTT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gstt1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GSTT1 HDRプラスミド（m）および GSTT1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGstt1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGstt1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。