GSTM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406828

概要

GSTM5は、還元型グルタチオンを求電子性化合物に抱合させる反応を触媒する第II相解毒酵素であるグルタチオンS-トランスフェラーゼ・ミュー5（GSTM5）をコードしており、外来異物（ゼノバイオティクス）や活性酸素種に対する細胞防御を支えます。グルタチオン依存性のレドックスネットワークの一部として、GSTM5はプロテオスタシスの維持に寄与し、脂質・タンパク質・DNAに対する酸化損傷を抑制します。GSTMファミリーの活性の変動や制御異常は、酸化ストレスや炎症シグナルに対する感受性の変化と関連していることが報告されており、これらの過程は発がんや組織障害にしばしば関与します。ヒト細胞においてGSTM5は、化学物質代謝、環境曝露への応答、ならびに細胞のレドックス恒常性を規定する機構の文脈で研究されることが多いです。

GSTM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGSTM5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GSTM5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GSTM5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GSTM5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GSTM5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GSTM5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GSTM5の機能に不可欠なGSTM5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GSTM5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GSTM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGSTM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GSTM5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GSTM5 HDRプラスミド（h）および GSTM5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGSTM5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGSTM5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。