GSTM2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404795-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GSTM2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GSTM2ダブルニカースプラスミド（h）およびGSTM2ダブルニカースプラスミド（h2）は、GSTM2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: GSTM2 抗体 (E-9): sc-376486
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GSTM2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404795-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSTM2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404795-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
グルタチオンS-トランスフェラーゼmu 2（GSTM2）は、細胞質に存在する第II相解毒酵素であり、求電子性の外来性化学物質や内因性の脂質過酸化生成物に対するグルタチオン抱合反応を触媒することで、レドックス恒常性の維持および酸化ストレスに対する細胞防御を支えます。グルタチオン代謝ネットワークの一部として、GSTM2は反応性中間体の生体内変換に寄与し、酸化傷害や炎症関連シグナルに対する細胞の感受性に影響を与え得ます。GSTM2の発現量や活性の変動は、化学物質感受性やストレス応答における個人差と関連づけられており、活性酸素種（ROS）や求電子体負荷が疾患関連の表現型を規定する文脈でしばしば研究対象となります。腫瘍生物学および毒性学研究においても、臨床的転帰を示唆することなく、環境曝露への応答や薬物代謝経路の調節におけるGSTM2の役割が検討されています。
GSTM2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GSTM2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GSTM2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GSTM2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GSTM2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。