GRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402811

概要

ガストリン放出ペプチド（GRP）は神経ペプチドの一種で、主にGRPRを含むボンベシン受容体ファミリーを介してシグナルを伝達し、細胞内カルシウムフラックス、ホスホリパーゼC活性、ならびに下流のMAPK/ERKおよびPI3K-AKTシグナル伝達を制御します。ヒト組織においてGRPは、神経内分泌コミュニケーション、上皮の恒常性維持、分泌反応および収縮反応の調節に寄与します。GRP–GRPRシグナルの制御異常は、増殖・遊走・神経炎症反応の変化と関連づけられており、GRPはがん化シグナルや腫瘍―微小環境間クロストークの研究における重要な結節点となっています。さらに、GRPの発現やプロセシングは、ペプチドホルモンの成熟や調節性分泌の経路とも交差しており、神経内分泌状態やシグナル可塑性のマーカーとしての利用も支持されます。

GRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGRP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GRP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GRPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GRP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRPの機能に不可欠なGRPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GRPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GRP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRP HDRプラスミド（h）および GRP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGRPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGRP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。