group VI iPLA₂ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424697

概要

Pla2g6 は、第VI群 iPLA2（Ca2+非依存性ホスホリパーゼA2）をコードしており、膜リン脂質を加水分解してリゾリン脂質および遊離脂肪酸（アラキドン酸を含む）を放出します。脂質リモデリングとシグナル伝達を介して、膜恒常性、ミトコンドリアの完全性、小胞輸送、ならびに下流のエイコサノイド経路や酸化ストレス経路に影響を与えます。マウス系では、Pla2g6 活性が神経変性様表現型、炎症に伴う脂質メディエーター産生、代謝的に活動性の高い組織における膜損傷感受性と関連することが示されています。これらの機能により、Pla2g6 は脂質駆動性の細胞ストレス応答制御や神経炎症関連プロセスを研究するうえで有用なノードとなります。

group VI iPLA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPla2g6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pla2g6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pla2g6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、group VI iPLA2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、group VI iPLA2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pla2g6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• group VI iPLA2の機能に不可欠なPla2g6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pla2g6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• group VI iPLA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびgroup VI iPLA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pla2g6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  group VI iPLA2 HDRプラスミド（m）および group VI iPLA2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPla2g6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPla2g6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。