GRK 4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402816

Panoramica

GRK4 codifica la chinasi 4 dei recettori accoppiati a proteine G (GRK4), una chinasi serina/treonina che fosforila i GPCR attivati per favorire il reclutamento di β-arrestina, la desensibilizzazione del recettore e il suo traffico intracellulare. L’attività di GRK4 influenza la dinamica della segnalazione in vie legate a cAMP/PKA e agli output MAPK a valle, modulando l’intensità e la durata delle risposte mediate dai recettori. In contesti rilevanti per rene e apparato vascolare, GRK4 è stata studiata per i suoi effetti sulla regolazione dei recettori dopaminergici e sulla gestione del sodio, collegandola a fenotipi di regolazione della pressione arteriosa. Un’alterata espressione di GRK4 o varianti funzionali sono state associate ad ambiti di ricerca cardiovascolare e renale in cui l’omeostasi della segnalazione dei GPCR risulta compromessa.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRK 4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GRK4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GRK4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GRK4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRK 4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GRK4 per lo studio della segnalazione di GRK 4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GRK4 critici per la funzione di GRK 4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GRK4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GRK 4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GRK 4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GRK4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GRK 4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GRK 4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GRK4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GRK4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.