The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
granzyme B双切口酶质粒(m): sc-420745-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- granzyme B 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- granzyme B双切酶质粒（m）和granzyme B双切酶质粒（m2）编码针对Gzmb的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：granzyme B: sc-8022，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
granzyme B双切口酶质粒(m) | sc-420745-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
granzyme B双切口酶质粒(m2) | sc-420745-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Gzmb 基因编码颗粒酶 B（granzyme B），这是一种细胞毒性丝氨酸蛋白酶，储存在活化的 CD8+ T 细胞和 NK 细胞的溶解颗粒中，并在免疫突触处释放以清除靶细胞。颗粒酶 B 在穿孔素介导进入细胞质后，会切割关键底物以启动凋亡与炎症程序，包括激活半胱天冬酶（caspase），以及裂解可放大细胞死亡信号的细胞内蛋白。Gzmb 的活性是细胞毒性淋巴细胞效应功能的核心，并塑造抗原特异性免疫，对免疫监视、免疫病理以及炎症环境中的组织损伤均具有广泛意义。在小鼠模型中，颗粒酶 B 的表达或活性失调与免疫细胞细胞毒性改变有关，并可影响类自身免疫性炎症、感染应答以及肿瘤–免疫相互作用的严重程度。
granzyme B 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Gzmb 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Gzmb内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Gzmb的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Gzmb基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。