granzyme BCRISPR激活质粒(h): sc-401469-ACT

人类 GZMB 基因编码颗粒酶 B（granzyme B），这是一种胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，储存在 CD8+ T 细胞和 NK 细胞的细胞毒性颗粒中，在穿孔素（perforin）依赖性递送进入靶细胞后介导其杀伤。颗粒酶 B 可切割关键底物以激活依赖半胱天冬酶（caspase）的凋亡，也可通过扰动线粒体引发不依赖 caspase 的死亡通路，使其与抗原识别和炎症信号下游的免疫效应程序相衔接。GZMB 的表达与活性失调与慢性炎症和自身免疫中的免疫驱动性组织损伤与重塑有关，也与癌症及病毒感染情境下细胞毒性免疫监视的改变相关。因此，GZMB 被广泛用作细胞毒性淋巴细胞活化的功能性标志物，并作为研究凋亡、免疫突触生物学和免疫病理机制的关键节点。

granzyme B CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GZMB的表达。

granzyme B CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GZMB基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GZMB转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性granzyme B表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GZMB位点，并能够研究内源性位点上依赖于granzyme B的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GZMB表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟granzyme B通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。