GPR22 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-428483

Panoramica

Gpr22 codifica GPR22, un recettore orfano accoppiato a proteine G (GPCR) studiato soprattutto in biologia cardiaca e vascolare, dove è stato collegato alla regolazione di vie di segnalazione sensibili allo stress e di programmi di rimodellamento cellulare. Sebbene il suo ligando endogeno resti non chiarito, un accoppiamento di tipo GPCR suggerisce una possibile influenza su vie dei secondi messaggeri, come la segnalazione cAMP/PKA e MAPK, che modellano le risposte trascrizionali, il metabolismo e la funzione contrattile. In modelli murini e in studi di espressione, GPR22 è stato associato a fenotipi cardiovascolari, tra cui ipertrofia cardiaca e rimodellamento correlato all’insufficienza cardiaca, motivo per cui se ne indaga il ruolo nell’omeostasi dei cardiomiociti e delle cellule vascolari. Gpr22 viene anche utilizzato come marcatore in profili trascrizionali specifici di tessuto per collegare gli stati di segnalazione dei GPCR a reti geniche rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR22 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gpr22 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gpr22 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gpr22 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR22.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gpr22 per lo studio della segnalazione di GPR22, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gpr22 critici per la funzione di GPR22
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gpr22 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GPR22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gpr22. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR22 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GPR22 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gpr22 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gpr22 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.