GPR105 Lentiviral Activation Particles (h): sc-405954-LAC

P2RY14 (GPR105) kodiert einen Gi-gekoppelten purinergen GPCR, der extrazelluläre UDP-Zucker wie UDP-Glukose und UDP-Galaktose erkennt und damit die Freisetzung von Nukleotid-Zuckern mit Immun- und Epithel-Signalkaskaden verknüpft. Die Rezeptoraktivierung senkt typischerweise cAMP und kann MAPK/ERK- sowie chemotaktische Programme modulieren, wodurch Leukozytenrekrutierung, Zytokinantworten und barriereassoziierte Entzündungen geprägt werden. Die GPR105-Aktivität überschneidet sich mit purinergen Gefahrensignalen in Situationen von Gewebestress und mikrobieller Exposition, was sie für Untersuchungen entzündlicher Netzwerke und der Kommunikation in der Tumor‑Immun‑Mikroumgebung relevant macht. Veränderte P2RY14-Expression und geänderte Kopplung an Signalwege wurden mit dysregulierten myeloiden und epithelialen Antworten in Verbindung gebracht und sprechen für eine Untersuchung in Modellen der Immunologie, Fibrose und Krebsbiologie.

GPR105 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente P2RY14-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GPR105 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der P2RY14-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GPR105-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen P2RY14-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.