GPR105 Double Nickaseプラスミド (m): sc-431244-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GPR105 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GPR105ダブルニカースプラスミド（m）およびGPR105ダブルニカースプラスミド（m2）は、P2ry14を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GPR105 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-431244-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR105 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-431244-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスP2ry14は、Gタンパク質共役受容体（GPCR）であるGPR105（P2Y14）をコードしており、UDP-グルコースなどのUDP-糖によって活性化されるヌクレオチド糖受容体である。GPR105の活性化はcAMPレベルを調節し、走化性、サイトカイン産生、自然免疫の活性化を形作る下流経路に影響を与え得る。これまでに、骨髄系細胞の機能やバリア関連炎症における役割が報告されている。マウス系では、P2ry14活性が炎症応答や代謝ストレスシグナルと関連付けられており、気道および腸管の炎症、脂肪組織の免疫代謝、ミクログリアに関連する神経炎症過程の研究において重要である。細胞外ヌクレオチド代謝と免疫シグナルの接点に位置するGPCRとして、P2ry14は組織恒常性や疾患関連の炎症回路に対するプリン作動性制御を解析するためにしばしば用いられる。
GPR105 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における P2ry14 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、P2ry14内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、P2ry14の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、P2ry14が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。