GPD2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402698-NIC

GPD2 codifica a glicerol-3-fosfato desidrogenase mitocondrial, um componente flavoproteico essencial da lançadeira do glicerofosfato, que transfere equivalentes redutores citosólicos para as mitocôndrias ao acoplar a oxidação do glicerol-3-fosfato à redução da ubiquinona. Essa atividade conecta a glicólise à fosforilação oxidativa, influencia o equilíbrio redox celular e sustenta o metabolismo de lipídios e glicerolipídios por meio do controle dos reservatórios de glicerol-3-fosfato. Ao modular o transporte de elétrons mitocondrial e a geração de espécies reativas de oxigênio, a GPD2 contribui para a flexibilidade metabólica em condições de estresse nutricional e em contextos associados à hipóxia. A desregulação da função de GPD2 tem sido investigada em relação a fenótipos de doenças metabólicas e a estados bioenergéticos alterados observados em diferentes modelos de pesquisa em câncer e em estudos ligados ao sistema endócrino.

GPD2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GPD2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GPD2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GPD2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GPD2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.