GPAM CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403961-ACT

ヒトGPAM（ミトコンドリア型グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼ）は、グリセロール-3-リン酸と長鎖アシルCoAをリゾホスファチジン酸へ変換することで、de novoグリセロ脂質合成の初発かつ律速段階を触媒します。この酵素活性は、ミトコンドリアにおける脂質の取り扱いをホスファチジン酸の産生、トリアシルグリセロールの組み立て、さらに広範なリン脂質リモデリングへと結び付け、膜の新生（膜生合成）や脂肪滴形成に影響を与えます。GPAMは脂肪酸利用とエネルギー恒常性の接点で機能し、その下流ではシグナル脂質や代謝ネットワークのバランスにも影響が及びます。GPAMの発現量や活性の変化は、脂質代謝の破綻に伴う表現型（脂肪肝、インスリン抵抗性、心血管代謝リスク関連経路など）と関連づけられており、代謝生物学における機序解明研究の有用な標的（ノード）となります。

GPAM CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPAMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPAM CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPAM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPAM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPAMの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPAM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPAM依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPAM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPAM経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。