GPAA1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411203-ACT

GPAA1（glycosylphosphatidylinositol anchor attachment 1）は、小胞体に存在するGPIトランスアミダーゼ複合体の中核サブユニットをコードし、新たに合成されたタンパク質にグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカーを付加する反応を触媒する。このプロセシング段階により、シグナル伝達、接着、免疫調節に関与する多くの細胞表面タンパク質が適切に膜へ係留され、輸送されるようになり、GPAA1は小胞体におけるタンパク質品質管理および分泌経路の恒常性と関連付けられる。GPIアンカー生合成の異常は、細胞表面プロテオームの構成や、受容体介在性シグナル伝達、細胞—細胞相互作用などの下流経路を攪乱しうる。GPAA1および関連するGPIアンカー経路遺伝子は、糖鎖付加異常症（先天性糖鎖付加異常）の文脈や、神経発達表現型、ならびに小胞体プロセシング不全に伴う細胞ストレス応答に関連して研究されている。

GPAA1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPAA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPAA1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPAA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPAA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPAA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPAA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPAA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPAA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPAA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。