GP49B Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420634-ACT

O gene murino Lilrb4a codifica o GP49B, um receptor inibitório da superfamília das imunoglobulinas expresso predominantemente em células da linhagem mieloide, incluindo mastócitos e macrófagos. O GP49B contém motivos ITIM citoplasmáticos que recrutam fosfatases como SHP-1/2, atenuando cascatas de sinalização acopladas a receptores Fc e a integrinas e limitando o fluxo de cálcio, a desgranulação, a liberação de citocinas e a ativação fagocítica. Por meio da modulação de checkpoints da imunidade inata, o Lilrb4a influencia o tônus inflamatório, a apresentação de antígenos e programas de remodelamento tecidual em compartimentos de barreira e hematopoéticos. Assim, a sinalização desregulada de GP49B é relevante para estudos mecanísticos de homeostase imunológica, inflamação alérgica e patologia dirigida por células mieloides em modelos murinos.

GP49B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lilrb4a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GP49B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lilrb4a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lilrb4a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GP49B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lilrb4a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GP49B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GP49B em células tumorais com expressão de Lilrb4a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.