GM2/GD2 Synthase Double Nickase Plasmid (h): sc-403592-NIC

B4GALNT1 kodiert die GM2/GD2-Synthase, eine im Golgi-Apparat lokalisierte β1,4‑N‑Acetylgalactosaminyltransferase, die die Umwandlung von aus Lactosylceramid abgeleiteten Gangliosiden zu GM2 und GD2 katalysiert und damit die Zusammensetzung von Glycosphingolipiden in der Plasmamembran prägt. Durch die Regulation der Gangliosid-Biosynthese beeinflusst dieses Enzym die Organisation von Membran-Mikrodomänen, die Rezeptorsignalgebung und Zell‑Zell‑Interaktionen und verknüpft so den Glycosylierungsstatus mit Signalwegen, die Adhäsion und Signaltransduktion steuern. Veränderte Gangliosidprofile und eine veränderte B4GALNT1‑Aktivität wurden mit Änderungen der neuronalen Entwicklung und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht und werden häufig in Kontexten untersucht, in denen ein Umbau von Glycosphingolipiden die zelluläre Identität und Stressantworten beeinflusst. Als Knotenpunkt-Enzym im Glykolipidstoffwechsel ist B4GALNT1 ein nützliches Ziel, um zu untersuchen, wie Glykanstrukturen den Proteintransport, die Immunerkennung und die Präsentation von Oberflächenantigenen modulieren.

GM2/GD2 Synthase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des B4GALNT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von B4GALNT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die B4GALNT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit B4GALNT1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.