GlyT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403077

概要

SLC6A5 は、シナプス前終末に存在するグリシントランスポーター GlyT2（SLC6 ファミリー）をコードしています。GlyT2 は Na⁺/Cl⁻ 依存性のトランスポーターで、抑制性のグリシン作動性ニューロンにおいてグリシンを高親和性で再取り込みします。細胞質内のグリシンを補充して小胞への取り込み（装填）を可能にすることで、GlyT2 は脊髄および脳幹における迅速なシナプス抑制を支え、神経回路の興奮性の形成にも寄与します。このトランスポーターは、抑制トーンや感覚運動回路の出力を制御する神経伝達物質の循環や塩化物恒常性の過程と連携しています。SLC6A5 の機能破綻や調節異常は、グリシン作動性シグナル伝達の障害と関連し、遺伝性驚愕症（hereditary hyperekplexia）や関連する抑制性シナプス機能不全に結び付く神経生理学的表現型との関連が示されています。

GlyT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC6A5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC6A5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC6A5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GlyT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GlyT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC6A5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GlyT2の機能に不可欠なSLC6A5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC6A5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GlyT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGlyT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC6A5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GlyT2 HDRプラスミド（h）および GlyT2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC6A5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC6A5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。