GlyR α4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416048-ACT

GLRA4は、グリシン受容体α4（GlyR α4）をコードしており、これはリガンド作動性塩化物チャネルのサブユニットとして、グリシン依存的な過分極を介して中枢神経系における迅速な抑制性神経伝達に寄与します。GlyR複合体は、塩化物イオンのコンダクタンスや、GABA作動性シグナル伝達を含む他の抑制性経路とのクロストークを通じて、神経細胞の興奮性およびネットワーク同期を調節します。GLRA4はGLRAファミリーの他のメンバーと比べて十分に特徴づけられていないものの、グリシン作動性受容体の生物学は一般に、運動制御、驚愕反射回路、シナプス抑制バランスと関連しており、これらは神経発達・精神神経系の表現型でしばしば関与が示される過程です。GLRA4を研究することは、臨床的転帰を示唆することなく、受容体アセンブリー、シナプス機能、ならびに神経系疾患に関連する抑制性シグナルの変化に関する機序解明研究を支援します。

GlyR α4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GLRA4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GlyR α4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GLRA4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGLRA4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GlyR α4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGLRA4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGlyR α4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGLRA4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGlyR α4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。