Glucose Transporter Glut4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400158-ACT

SLC2A4 codifica per il trasportatore del glucosio Glut4, un trasportatore facilitato sensibile all’insulina che media l’assorbimento di glucosio dipendente dallo stimolo negli adipociti e nel muscolo scheletrico. In seguito alla segnalazione insulinica attraverso l’asse PI3K–AKT, Glut4 trasloca dalle vescicole di deposito intracellulari alla membrana plasmatica, collegando l’attivazione del recettore all’utilizzo cellulare del glucosio e alla sintesi di glicogeno. Il traffico di Glut4 è modulato anche da vie di stress metabolico dipendenti da AMPK e dal macchinario di fusione vescicolare, integrando la disponibilità di nutrienti con l’omeostasi energetica. Un’espressione deregolata di SLC2A4 o una traslocazione compromessa di Glut4 è implicata nella resistenza all’insulina e in fenotipi di malattia metabolica, rendendolo un nodo chiave per lo studio della gestione del glucosio in modelli cellulari umani.

Glucose Transporter Glut4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC2A4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Glucose Transporter Glut4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC2A4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC2A4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Glucose Transporter Glut4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC2A4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Glucose Transporter Glut4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Glucose Transporter Glut4 nelle cellule tumorali con espressione di SLC2A4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.