GLI-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420577

Panoramica

Gli3 codifica GLI-3, un fattore di trascrizione a dita di zinco che, nella segnalazione Hedgehog, agisce come attivatore o repressore in modo dipendente dal contesto, integrando segnali provenienti dalle ciglia primarie per regolare programmi di espressione genica dello sviluppo. Nel topo, GLI-3 è fondamentale per la corretta modellazione di arti, tubo neurale e strutture cranio-facciali, controllando gli output trascrizionali a valle di PTCH1/SMO e modulando l’attività della famiglia GLI. La processazione proteolitica e la regolazione post-traduzionale di GLI-3 contribuiscono a definire i gradienti morfogenetici e la formazione di confini durante l’embriogenesi. Un’attività di Gli3 disregolata è associata a fenotipi di malformazioni congenite ed è spesso utilizzata come modello per indagare l’omeostasi tissutale dipendente da Hedgehog e il rimodellamento oncogenico della via.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GLI-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gli3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gli3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gli3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GLI-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gli3 per lo studio della segnalazione di GLI-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gli3 critici per la funzione di GLI-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gli3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GLI-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GLI-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gli3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GLI-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GLI-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gli3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gli3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.