GKLF/KLF4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400312-NIC

KLF4（GKLF）は、上皮分化、細胞周期制御、ならびに細胞アイデンティティの維持を調節する亜鉛フィンガー型転写因子をコードします。MAPK、Wnt/β-カテニン、TGF-βシグナル伝達に関連する転写プログラムを調整することで、KLF4は増殖、バリア機能、ストレス応答（p53依存性チェックポイントとのクロストークを含む）に影響を及ぼします。KLF4はまた、代表的なリプログラミング因子の一つであり、系譜転換におけるクロマチン状態のリモデリングにも寄与します。KLF4活性の破綻は、分化状態の変化や、がん化および炎症性病態における文脈依存的な役割と関連づけられており、転写制御の機構研究に有用なノードとされています。

GKLF/KLF4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KLF4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KLF4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KLF4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KLF4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。