Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GKLF/KLF4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400312-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GKLF/KLF4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GKLF/KLF4 Double-Nickase-Plasmid (h) und GKLF/KLF4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KLF4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GKLF/KLF4: sc-393462
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GKLF/KLF4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400312-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GKLF/KLF4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400312-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KLF4 (GKLF) kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der die epitheliale Differenzierung, die Kontrolle des Zellzyklus und die Aufrechterhaltung der zellulären Identität reguliert. Durch die Modulation von Transkriptionsprogrammen, die mit der MAPK-, Wnt/β-Catenin- und TGF-β-Signalgebung verknüpft sind, beeinflusst KLF4 Proliferation, Barrierefunktion und Stressantworten, einschließlich Crosstalk mit p53-abhängigen Checkpoints. KLF4 ist außerdem einer der kanonischen Reprogrammierungsfaktoren und trägt während der Linienkonversion zur Umgestaltung des Chromatinzustands bei. Eine fehlregulierte KLF4-Aktivität wurde mit veränderten Differenzierungszuständen sowie kontextabhängigen Rollen in der Onkogenese und bei entzündlichen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was KLF4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der transkriptionellen Regulation macht.
GKLF/KLF4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KLF4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KLF4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KLF4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KLF4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.