GKLF/KLF4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421298-ACT

O Klf4 de camundongo (GKLF/KLF4) codifica um fator de transcrição com dedos de zinco que regula a diferenciação epitelial, o controle do ciclo celular e a manutenção da identidade celular ao coordenar programas transcricionais específicos de linhagem. O KLF4 modula vias associadas à pluripotência e à reprogramação, incluindo integração com WNT/β-catenina, TGF-β/SMAD e respostas ao estresse dependentes de p53, além de influenciar a função de barreira e a sinalização inflamatória em tecidos epiteliais. Dependendo do contexto celular, alterações na expressão de Klf4 desestabilizam o equilíbrio entre proliferação e diferenciação e podem contribuir para uma homeostase tecidual desregulada relevante para transformação oncogênica, fibrose e fenótipos de reparo de feridas. Em modelos murinos, o Klf4 é amplamente utilizado para estudar a reprogramação de células somáticas, a biologia epitelial e redes transcricionais que governam pluripotência e diferenciação.

GKLF/KLF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Klf4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GKLF/KLF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Klf4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Klf4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GKLF/KLF4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Klf4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GKLF/KLF4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GKLF/KLF4 em células tumorais com expressão de Klf4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.