GHS-R1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401724-NIC

GHSR codifica il recettore 1 dei secretagoghi dell’ormone della crescita (GHS-R1), un GPCR di classe A responsivo alla grelina che regola l’appetito, l’omeostasi energetica e la segnalazione neuroendocrina. In seguito al legame con il ligando, GHS-R1 si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, aumentare il Ca2+ intracellulare e modulare la segnalazione MAPK/ERK, con un ulteriore bias verso vie dipendenti da Gi/o in alcuni contesti cellulari. Il recettore è ampiamente studiato nei circuiti ipotalamici e ipofisari, oltre che nei tessuti periferici, integrando segnali metabolici con il rilascio dell’ormone della crescita e con output autonomici. Una deregolazione della segnalazione di GHSR è stata implicata in fenotipi correlati all’obesità, nella sensibilità all’insulina e in alterazioni dei circuiti di ricompensa e dello stress, a supporto della sua rilevanza in modelli di ricerca metabolica e neuropsichiatrica.

GHS-R1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GHSR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GHSR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GHSR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GHSR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.