GGPS1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404003-ACT

Il gene umano **GGPS1** codifica la geranilgeranil difosfato sintasi 1, un enzima chiave della via del mevalonato che produce pirofosfato di geranilgeranile (GGPP) per la prenilazione delle proteine e la successiva biosintesi degli isoprenoidi. Fornendo GGPP, GGPS1 supporta la localizzazione di membrana e la segnalazione delle piccole GTPasi e di altre proteine prenilate, influenzando il traffico vescicolare, la dinamica del citoscheletro, la funzione mitocondriale e, più in generale, l’omeostasi metabolica. L’alterazione della prenilazione legata a GGPS1 è stata associata a una deregolazione della crescita e della segnalazione di risposta allo stress ed è spesso studiata in contesti in cui il flusso del mevalonato e le vie dipendenti dalla prenilazione contribuiscono a fenotipi rilevanti per la malattia. Di conseguenza, GGPS1 rappresenta un nodo utile per indagare il crosstalk tra metabolismo lipidico e segnalazione, la proteostasi e le vulnerabilità di via in modelli cellulari.

GGPS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GGPS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GGPS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GGPS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GGPS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GGPS1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GGPS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GGPS1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GGPS1 nelle cellule tumorali con espressione di GGPS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.