GGPS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404003-ACT

O GGPS1 humano codifica a geranilgeranil difosfato sintase 1, uma enzima-chave da via do mevalonato que produz pirofosfato de geranilgeranil (GGPP) para a prenilação de proteínas e para a biossíntese de isoprenoides a jusante. Ao fornecer GGPP, o GGPS1 sustenta a localização em membrana e a sinalização de pequenas GTPases e de outras proteínas preniladas, influenciando o tráfego vesicular, a dinâmica do citoesqueleto, a função mitocondrial e a homeostase metabólica de forma mais ampla. A perturbação da prenilação ligada ao GGPS1 tem sido associada à desregulação de sinais de crescimento e de resposta ao stress e é frequentemente estudada em contextos em que o fluxo da via do mevalonato e vias dependentes de prenilação contribuem para fenótipos relevantes para a doença. Como resultado, o GGPS1 serve como um nó útil para investigar o crosstalk entre metabolismo lipídico e sinalização, a proteostase e vulnerabilidades de vias em modelos celulares.

GGPS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GGPS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GGPS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GGPS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GGPS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GGPS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GGPS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GGPS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GGPS1 em células tumorais com expressão de GGPS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.