GFRαL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-436523

概要

マウスのGfralは、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の共受容体であるGFRαL（GFRAL）をコードしており、GDF15に選択的に結合してRET受容体チロシンキナーゼを介したシグナル伝達を担う。この経路は下流のMAPK/ERKおよびPI3K/AKTシグナルを活性化し、エネルギーバランス、摂食行動、全身の代謝恒常性を制御する神経回路を調節する。GFRALの発現は食欲制御に関与する後脳領域で高く、前臨床モデルにおいてGDF15–GFRAL–RETシグナルが体重調節やストレスに伴う拒食様反応と関連することを示している。そのためGfralは、神経‐代謝シグナル、悪液質関連の生物学、ならびに炎症性シグナルが中枢の代謝制御へ結び付く機序の研究で広く注目されている。

GFRαL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGfral遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gfral内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gfralのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GFRαLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GFRαLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gfral欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GFRαLの機能に不可欠なGfralエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gfralゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GFRαL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGFRαL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gfral遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GFRαL HDRプラスミド（m）および GFRαL HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGfralホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGfral標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。