GFRα-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405061

Visão geral

GFRA3 codifica o receptor humano alfa-3 da família do fator neurotrófico derivado de linhagem de células gliais (GDNF) (GFRα-3), um correceptor ancorado por GPI que confere especificidade de ligante ao fator neurotrófico artemina e a ligantes relacionados da família GDNF. Após a ligação do ligante, o GFRα-3 coopera com a tirosina quinase do receptor RET para iniciar cascatas de sinalização, incluindo MAPK/ERK e PI3K/AKT, que regulam a sobrevivência neuronal, a diferenciação e a orientação axonal. GFRA3 é amplamente estudado no desenvolvimento do sistema nervoso periférico e em interações neuroimunes, em que a sinalização alterada receptor-ligante tem sido associada a mecanismos relevantes para a função de neurônios sensoriais e o processamento da dor inflamatória. A sinalização desregulada RET/família GDNF envolvendo GFRA3 também é investigada em contextos de sinalização de células tumorais, invasão e comunicação com o microambiente em modelos selecionados de câncer.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GFRα-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GFRA3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GFRA3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GFRA3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GFRα-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GFRA3 para a investigação da sinalização de GFRα-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GFRA3 críticos para a função GFRα-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GFRA3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GFRα-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GFRα-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GFRA3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GFRα-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GFRα-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GFRA3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GFRA3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.