galectin-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402321-ACT

O LGALS9 humano codifica a galectina-9, uma lectina ligante de β-galactosídeos que modula as interações célula–célula e célula–matriz por meio do reconhecimento de recetores glicosilados e de componentes da matriz extracelular. A galectina-9 influencia a sinalização imunitária e o tónus inflamatório ao moldar respostas de citocinas, o tráfego de leucócitos e programas de apoptose, e pode remodelar a comunicação entre tumor e sistema imunitário através de vias associadas a checkpoints, como o TIM-3. Funções descritas ligam o LGALS9 à regulação da exaustão de células T, à polarização de células mieloides e à comunicação epitélio–estroma, com relevância para a imunobiologia do cancro, a autoimunidade e doenças inflamatórias crónicas. A sua atividade também está associada a processos de resposta ao stress e a processos vesiculares/secretórios que afetam a disponibilidade de galectina-9 solúvel em microambientes tecidulares.

galectin-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LGALS9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

galectin-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LGALS9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LGALS9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de galectin-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LGALS9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de galectin-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via galectin-9 em células tumorais com expressão de LGALS9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.