GALC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401025

Panoramica

GALC codifica la galattocerebrosidasi, un’idrolasi lisosomiale che catabolizza galattolipidi quali galattosilceramide e psicosina, supportando il turnover degli sfingolipidi e l’omeostasi lipidica della mielina. Contribuendo al riciclo dei lipidi di membrana dipendente dai lisosomi, GALC collega la funzione lisosomiale a vie più ampie del metabolismo degli sfingolipidi, delle risposte allo stress cellulare e della fisiologia neuro-gliale. Un’attività alterata di GALC è associata a una gestione disfunzionale della psicosina e a un equilibrio perturbato dei lipidi correlati alla mielina, rendendolo rilevante per gli studi sui meccanismi delle leucodistrofie e sui processi neurodegenerativi guidati dai lisosomi. Nelle cellule umane, GALC rappresenta un nodo utile per analizzare come il catabolismo lisosomiale dei lipidi influenzi composizione di membrana, traffico intracellulare e vitalità cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GALC (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GALC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GALC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GALC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GALC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GALC per lo studio della segnalazione di GALC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GALC critici per la funzione di GALC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GALC per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GALC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GALC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GALC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GALC Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GALC (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GALC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GALC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.