GADD 45γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402483

概要

GADD45G（GADD45γ）は、増殖停止およびDNA損傷誘導（GADD45）ファミリーに属するストレス誘導性タンパク質で、遺伝毒性ストレスや炎症性刺激を細胞周期制御、DNA修復、アポトーシスへとつなぐ役割を担います。p38やJNK経路を含むMAPKシグナル伝達を調節し、チェックポイント制御とも連携して、細胞ストレス下でのG2/M期停止やゲノム安定性の維持を促進します。ヒト細胞では、GADD45γの発現異常が、複数の疾患状況において増殖制御の破綻、ストレス応答の低下、異常な生存シグナルと関連することが報告されており、ストレス適応の分子機構を解析する上で有用な研究対象（ノード）となっています。環境刺激を転写プログラムおよびチェックポイントプログラムと統合するという機能は、DNA損傷応答、細胞老化、腫瘍抑制様経路に関する研究を後押しします。

GADD 45γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGADD45G遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GADD45G内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GADD45Gのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GADD 45γタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GADD 45γシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GADD45G欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GADD 45γの機能に不可欠なGADD45Gエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GADD45Gゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GADD 45γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGADD 45γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GADD45G遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GADD 45γ HDRプラスミド（h）および GADD 45γ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGADD45Gホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGADD45G標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。