G3PP/PGP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402332-ACT

ヒトPGP（G3PP：glycerol-3-phosphate phosphataseとも呼ばれる）は、グリセロール-3-リン酸を加水分解してグリセロールに変換する細胞質ホスファターゼをコードしており、グリセロ脂質代謝を解糖系フラックスおよびレドックス恒常性と結び付けている。グリセロール-3-リン酸の利用可能性を調節することで、G3PP/PGPはトリグリセリド合成、グリセロールリン酸シャトル、ミトコンドリアでのNADH再酸化に影響し、栄養過多や酸化ストレスに対する細胞応答の形成に関与する。この代謝制御は、肝臓、脂肪組織、骨格筋、膵β細胞におけるインスリン分泌と感受性、脂肪毒性、エネルギーバランスの研究に関連する。G3PP/PGP活性に結び付いたグリセロ脂質の処理異常やレドックス負荷は、メタボリックシンドローム、肥満に伴う炎症、糖尿病関連の細胞機能障害の文脈でしばしば検討されている。

G3PP/PGP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PGPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

G3PP/PGP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PGP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPGP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性G3PP/PGPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPGP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるG3PP/PGP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPGP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるG3PP/PGP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。