FXR/NR1H4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417410-ACT

NR1H4 codifica o receptor X farnesoide (FXR), um receptor nuclear ativado por ligantes que atua como um sensor transcricional de ácidos biliares e coordena programas gênicos metabólicos. Em hepatócitos e enterócitos, o FXR regula a síntese e o transporte de ácidos biliares (incluindo o controle por retroalimentação de CYP7A1), a homeostase de lipídios e glicose e a sinalização inflamatória por meio de interações com vias como SHP, FGF19/FGF15 e NF-κB. A atividade do FXR molda a circulação entero-hepática e influencia a função da barreira intestinal e a comunicação do eixo intestino–fígado. A desregulação da sinalização de NR1H4/FXR tem sido implicada em lesão hepática colestática, doença hepática gordurosa não alcoólica e carcinogênese hepatobiliar, tornando-o um nó central para estudos mecanísticos da biologia hepática metabólica e inflamatória.

FXR/NR1H4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NR1H4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FXR/NR1H4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NR1H4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NR1H4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FXR/NR1H4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NR1H4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FXR/NR1H4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FXR/NR1H4 em células tumorais com expressão de NR1H4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.