FUS/TLS Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400612-LAC

FUS (FUS/TLS) codifica una proteina legante RNA/DNA che collega la regolazione della trascrizione con lo splicing del pre‑mRNA, il trasporto dell’mRNA e la dinamica dei granuli di stress. FUS partecipa al mantenimento del genoma coordinando la risposta e la riparazione del danno al DNA, incluse vie associate alla segnalazione delle rotture a doppio filamento, e influenza programmi trascrizionali associati alla RNA polimerasi II. Attraverso i suoi domini a bassa complessità, FUS va incontro a separazione di fase, che modella gli assemblaggi ribonucleoproteici e influisce sulla proteostasi neuronale. La disregolazione o la mutazione di FUS è fortemente associata alla biologia delle malattie neurodegenerative, in particolare la sclerosi laterale amiotrofica e la demenza frontotemporale, ed è studiata anche in contesti di instabilità genomica e di oncogeni di fusione associati ai sarcomi.

Le particelle di attivazione lentivirale FUS/TLS (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FUS in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FUS/TLS (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FUS, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FUS/TLS. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FUS e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.