FUS/TLS Double Nickaseプラスミド (h): sc-400612-NIC

FUS（FUS/TLS）は、核と細胞質の間をシャトリングする多機能なRNA/DNA結合タンパク質をコードしており、転写、pre-mRNAスプライシング、RNA輸送、ストレス顆粒の動態を協調的に制御します。FUSはRNAポリメラーゼIIやゲノム安定性に影響する修復因子との相互作用を介して、二本鎖切断修復を含むDNA損傷応答にも関与します。FUSの制御異常、局在異常、または凝集は神経変性疾患の病態と関連しており、FUS活性の変化は腫瘍化に関わる転写プログラムにも関与すると示唆されています。これらの性質により、FUSはヒト細胞におけるRNA代謝、プロテオスタシス、そして遺伝毒性ストレスシグナル伝達を研究するうえで広く用いられる重要な標的となっています。

FUS/TLS ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FUS 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FUS内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FUSの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FUSが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。