Furin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400904-NIC

FURIN codifica a furina, uma convertase de pró-proteínas dependente de cálcio, predominantemente localizada na rede trans-Golgi e em compartimentos endossomais, onde cliva proteínas precursoras em motivos multibásicos para gerar fatores maduros bioativos. Por meio dessa atividade de processamento, a furina regula a maturação, na via secretora, de hormônios, fatores de crescimento, citocinas, receptores e enzimas que modificam a matriz extracelular, influenciando vias ligadas à sinalização celular, adesão e remodelamento tecidual. A função de FURIN integra-se ao tráfego vesicular e à proteostase, e alterações na atividade da furina têm sido associadas à desregulação da sinalização inflamatória, à progressão oncogênica e a mecanismos relacionados à entrada ou disseminação de patógenos em células hospedeiras. Como um nó central no processamento de pró-proteínas, a furina é frequentemente estudada para esclarecer como a maturação proteolítica controla o comportamento de redes de sinalização a jusante em modelos de células humanas.

Furin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FURIN em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FURIN. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FURIN. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FURIN interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.