FucT-IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401795

概要

FUT4 は、ゴルジ体に局在する α1,3-フコース転移酵素である FucT-IV をコードしている。この酵素は N-アセチルラクトサミン受容体にフコースを転移し、糖タンパク質や糖脂質上に Lewis X 型構造などのフコシル化糖鎖エピトープを生成する。FucT-IV は細胞表面の糖鎖修飾を形成することで、セレクチン媒介性の接着、白血球トラフィッキング、さらに糖鎖依存的なシグナル伝達や受容体ダイナミクスに影響を与える。FUT4 活性は、免疫細胞間相互作用、炎症応答、細胞移動を制御するフコース代謝および糖鎖付加経路とも連関している。文献では、FUT4 発現の異常やフコシル化パターンの変化が、腫瘍細胞の浸潤性、転移に関連する接着表現型、免疫微小環境との相互作用の変化と関連することが報告されており、糖鎖を介した生物学の機構研究における有用な結節点とされる。

FucT-IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFUT4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FUT4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FUT4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FucT-IVタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FucT-IVシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FUT4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FucT-IVの機能に不可欠なFUT4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FUT4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FucT-IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFucT-IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FUT4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FucT-IV HDRプラスミド（h）および FucT-IV HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFUT4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFUT4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。