FRS2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400656-ACT

FRS2（fibroblast growth factor receptor substrate 2）は、膜近傍に局在するアダプタータンパク質で、活性化されたFGFR（線維芽細胞増殖因子受容体）をRAS–MAPK/ERK経路やPI3K–AKT経路などの下流シグナル伝達カスケードへと連結します。FRS2はPTBドメインと複数のチロシンリン酸化部位を介してGRB2/SOSやGAB1のリクルートを統合的に制御し、増殖促進（マイトジェニック）および生存シグナルを伝播させることで、増殖・分化・遊走を規定します。FRS2依存的シグナル伝達は、FGFリガンドによって駆動される発生および組織恒常性維持プログラムの中核を成し、FGFR–FRS2軸の異常な活性化は、がん生物学における増殖シグナルの破綻に関与するとされています。経路の結節点として、FRS2は受容体型チロシンキナーゼシグナルの統合、フィードバック制御、ならびに他の増殖因子経路とのクロストークにおける役割の観点から、しばしば研究対象となります。

FRS2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FRS2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FRS2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FRS2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFRS2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FRS2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFRS2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFRS2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFRS2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFRS2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。