FRRS1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-406348-NIC

FRRS1（ferric chelate reductase 1）は、細胞のレドックス生物学や鉄の取り扱いに関与するとされる膜結合性タンパク質をコードしており、三価鉄（Fe³⁺）の還元を助けるとともに、細胞内の金属恒常性に影響を及ぼします。鉄の利用可能性や酸化還元バランスへの作用を通じて、FRRS1は代謝状態やストレス応答を調節し、ミトコンドリア機能や活性酸素種（ROS）を制御する経路と交差する形で影響し得ます。鉄／レドックス制御の変調は、神経組織をはじめとする高エネルギー需要の組織に広く関連し、金属恒常性の破綻は細胞の脆弱性に寄与し得ます。そのためFRRS1は、鉄代謝とプロテオスタシス、ニューロンのシグナル伝達の健全性、ならびに疾患関連ストレス表現型を結び付ける機構の文脈で研究されています。

FRRS1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FRRS1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FRRS1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FRRS1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FRRS1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。