FRRS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422860

概要

Frrs1 は、AMPA 型グルタミン酸受容体の成熟および機能制御に関与するとされる小胞体関連タンパク質 FRRS1 をコードします。神経細胞において FRRS1 は、受容体の組み立て／輸送やシナプスでの受容体利用可能性を支えることで、グルタミン酸作動性シナプスの発達と興奮性神経伝達に寄与します。FRRS1 に関連する過程が破綻すると、シナプス伝達の恒常性や神経回路活動が変化し得るため、Frrs1 は神経発達・神経学的表現型の基盤機構を研究するうえで重要な標的となります。そのため、マウスの Frrs1 モデルは、受容体生合成経路やシナプス可塑性に関連する細胞プログラムを解析するのに有用です。

FRRS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFrrs1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Frrs1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Frrs1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FRRS1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FRRS1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Frrs1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FRRS1の機能に不可欠なFrrs1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Frrs1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FRRS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFRRS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Frrs1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FRRS1 HDRプラスミド（m）および FRRS1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFrrs1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFrrs1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。