FRP-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422899

Visão geral

Sfrp4 codifica a proteína secretada relacionada a frizzled 4 (FRP-4), um modulador solúvel da sinalização Wnt que se liga a ligantes Wnt e/ou a receptores Frizzled para ajustar a saída das vias dependente de β-catenina e não canônicas. Em tecidos de camundongo, a FRP-4 contribui para a regulação de decisões de destino celular, proliferação, remodelamento da matriz extracelular e programas de diferenciação importantes para o padrão do desenvolvimento e a homeostase tecidual. A alteração na expressão de Sfrp4 tem sido associada à desregulação da atividade da via Wnt em contextos como fibrose, remodelamento metabólico de tecidos e biologia tumoral, nos quais mudanças no “tom” da sinalização Wnt podem impactar interações epitélio–mesênquima e respostas do estroma. Como regulador secretado da via, Sfrp4 é frequentemente estudado em redes de comunicação cruzada de sinalização que integram Wnt com TGF-β, sinais inflamatórios e programas transcricionais que especificam linhagens celulares.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FRP-4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sfrp4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sfrp4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sfrp4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FRP-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sfrp4 para a investigação da sinalização de FRP-4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sfrp4 críticos para a função FRP-4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sfrp4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FRP-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo FRP-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sfrp4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FRP-4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR FRP-4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sfrp4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sfrp4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.