FRAT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406802

Panoramica

FRAT2 (Frequently rearranged in advanced T-cell lymphomas 2) codifica una proteina citoplasmatica che modula la segnalazione canonica Wnt/β-catenina interagendo con GSK3β e influenzando la stabilità della β-catenina e i programmi trascrizionali a valle. Attraverso questa via, FRAT2 contribuisce alla regolazione della proliferazione e della differenziazione cellulare, nonché dei processi di patterning durante lo sviluppo, e può intersecarsi con reti di segnalazione più ampie che controllano la progressione del ciclo cellulare e le decisioni di destino cellulare. Un’attività alterata della via Wnt è implicata in molteplici contesti patologici, inclusi la trasformazione oncogena e il rimodellamento tissutale, rendendo FRAT2 un nodo utile per analizzare l’espressione genica dipendente dalla β-catenina. L’analisi funzionale di FRAT2 supporta studi meccanicistici sul crosstalk tra vie di segnalazione e sulla regolazione dipendente dal contesto in sistemi cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FRAT2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FRAT2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FRAT2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FRAT2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FRAT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FRAT2 per lo studio della segnalazione di FRAT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FRAT2 critici per la funzione di FRAT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FRAT2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FRAT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FRAT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FRAT2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FRAT2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FRAT2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FRAT2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FRAT2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.