FOXD2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-410785-LAC

FOXD2 codifica um fator de transcrição da família forkhead box (FOX) que regula programas de expressão gênica que controlam a especificação do destino celular, o comprometimento de linhagem e a diferenciação. Como uma proteína nuclear ligante de DNA, espera-se que o FOXD2 influencie o estado da cromatina e redes transcricionais que coordenam o padrão de desenvolvimento e a homeostase tecidual. A alteração da atividade de fatores de transcrição FOX está amplamente associada à proliferação desregulada, à plasticidade epitélio-mesenquimal e a mudanças no estado de diferenciação relevantes para o câncer e a biologia do desenvolvimento. Assim, o FOXD2 é de interesse para estudos de regulação transcricional, controle de enhancer–promotor e efeitos em nível de vias sobre a identidade celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais FOXD2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de FOXD2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais FOXD2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição FOXD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de FOXD2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo FOXD2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.