FOXC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403113-ACT

FOXC1 (forkhead box C1) è un fattore di trascrizione “winged-helix” che regola programmi genici responsabili del patterning embrionale, dello sviluppo della cresta neurale e del mesenchima perioculare, nonché della specificazione vascolare e linfatica. Agisce come regolatore di legame al DNA specifico per sequenza, integrando input di segnalazione dello sviluppo, incluse le reti trascrizionali associate a TGF-β/BMP e Wnt, per influenzare le decisioni di destino cellulare, la migrazione e il rimodellamento della matrice extracellulare. Un’espressione deregolata o mutazioni di FOXC1 sono fortemente collegate a disturbi di disgenesia del segmento anteriore, come lo spettro di Axenfeld–Rieger e il glaucoma congenito; inoltre, un’attività aberrante di FOXC1 è stata associata a differenziamento alterato e fenotipi invasivi in molteplici contesti oncologici. In quanto regolatore trascrizionale nodale, FOXC1 è ampiamente utilizzato per studiare l’impegno di linea, programmi simili alla transizione epitelio-mesenchimale e i circuiti di regolazione genica in modelli di sviluppo e di malattia.

FOXC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOXC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOXC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOXC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOXC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXC1 nelle cellule tumorali con espressione di FOXC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.