Fos B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400306-ACT

O FOSB humano codifica o Fos B, um fator de transcrição bZIP da família AP-1 que forma heterodímeros com proteínas JUN para regular programas de expressão gênica dependentes de estímulos. O Fos B é rapidamente induzido por fatores de crescimento, citocinas e atividade neuronal, conectando sinais extracelulares ao controle transcricional da proliferação, diferenciação, respostas ao estresse e plasticidade sináptica. Sua atividade se integra às redes de MAPK/ERK e de genes de resposta imediata, moldando vias a jusante envolvidas em inflamação e adaptação celular. A desregulação da sinalização de FOSB tem sido associada a fenótipos neuronais e imunológicos alterados e tem sido estudada no contexto do remodelamento transcricional relacionado ao câncer e de mecanismos de doenças neuropsiquiátricas.

Fos B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOSB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fos B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOSB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOSB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fos B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOSB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fos B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fos B em células tumorais com expressão de FOSB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.