FOG Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402620-ACT

O ZFPM1 humano codifica o Friend of GATA-1 (FOG), um cofator transcricional multi–dedos de zinco que se liga a proteínas da família GATA para modular programas gênicos específicos de linhagem. O FOG coordena complexos de cromatina ativadores e repressores, incluindo maquinarias associadas a NuRD/HDAC, para regular a diferenciação eritroide e megacariocítica, bem como aspectos mais amplos do desenvolvimento hematopoético. Por meio do controle de redes transcricionais que governam o comprometimento do destino celular, o ZFPM1 é frequentemente estudado em vias que moldam a hematopoiese, a biologia de plaquetas e a regulação gênica do desenvolvimento. A atividade desregulada de ZFPM1/FOG e o desequilíbrio de cofatores de GATA são relevantes para a diferenciação hematopoética aberrante e para modelos de pesquisa relacionados a distúrbios do sangue e do desenvolvimento.

FOG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZFPM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZFPM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZFPM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZFPM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOG em células tumorais com expressão de ZFPM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.