FOG-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401361-ACT

ZFPM2 codifica o friend of GATA-2 (FOG-2), um correagulador transcricional com múltiplos dedos de zinco que se liga a fatores da família GATA para moldar programas de expressão gênica específicos de linhagem. Em células humanas, o FOG-2 modula a ativação e a repressão transcricionais ao coordenar-se com complexos de remodelamento da cromatina e de correpressores, influenciando vias de desenvolvimento e diferenciação. Esse eixo regulatório está implicado na organogênese e na especificação do destino celular, e alterações na atividade de ZFPM2/FOG-2 estão associadas a redes transcricionais desreguladas em contextos relevantes para doenças, como defeitos cardíacos congênitos e biologia tumoral. Como cofator nodal em circuitos conduzidos por GATA, o FOG-2 é frequentemente estudado para entender como parcerias entre fatores de transcrição ajustam o estado epigenético e as saídas de sinalização a jusante.

FOG-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZFPM2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOG-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZFPM2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZFPM2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOG-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZFPM2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOG-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOG-2 em células tumorais com expressão de ZFPM2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.